Efeito do Consumo de Leite de Soja nas Concentrações de Estrogênio Sérico em Mulheres Japonesas Premenopausadas

Cada mulher foi pesada antes e depois do período de estudo dietético. Após o período do estudo dietético, as datas de início das duas menstruações seguintes foram relatadas pelos sujeitos.

As amostras de sangue foram centrifugadas a 1300g por 10 minutos à temperatura ambiente dentro de 3 horas após a coleta da amostra, e o soro foi separado. As amostras foram divididas em alíquotas de 1 ml e armazenadas a -80 °C até o doseamento. As concentrações séricas de estrona, estradiol e globulina de ligação ao hormônio sexual (SHBG) foram determinadas por radioimunoensaio usando kits comprados da Eiken Chemical Co. Ltd. (Tóquio), Diagnostic Products Cooperation, Japão (Chiba), e Pharmacia & Upjohn Co. Ltd. (Tóquio), respectivamente. Os coeficientes de variação intra-ensaio foram 7,4% para estrona, 2,5% para estradiol e 7,8% para SHBG.

Análise estatística

Para avaliar os efeitos do consumo de leite de soja no status hormonal, as concentrações de estrona, estradiol e SHBG antes e depois do período de estudo dietético foram comparadas com os grupos de controle e suplemento de leite de soja usando o teste Mann-Whitney. Os pares de Mann-Whitney e Wilcoxon assinados foram usados para comparar os valores das variáveis na linha de base e mudanças nessas variáveis durante o período do estudo. Os valores para as concentrações séricas de hormônios e a ingestão de nutrientes foram transformados em log para os pares de Wilcoxon assinados no teste de classificação. A análise de variância foi aplicada para comparar as durações dos quatro ciclos em cada grupo. Todos os valores de P foram calculados a partir de testes bicaudais de significância estatística.

Algumas amostras de sangue não puderam ser coletadas no 11º dia do ciclo 1 ou no 11º dia do ciclo 3 em alguns participantes por causa das férias escolares. As datas reais de amostragem variaram do dia 9 ao dia 13 para o ciclo 1 e do dia 7 ao dia 14 para o ciclo 3. Portanto, realizamos uma análise de subgrupo ( n = 44) restrita a sujeitos que forneceram amostras de sangue não mais do que 1 dia, além dos ciclos menstruais 1 e 3.

Resultados

Sessenta mulheres (31 no grupo suplementado com leite de soja e 29 no grupo controle) iniciaram o estudo. Uma comparação inicial de idade pré-intervenção, altura, peso e outras variáveis do estilo de vida, como estado tabágico, paridade e idade na menarca, não mostrou diferenças estatisticamente significativas entre o grupo suplementado com leite de soja e o grupo controle ( Tabela 1 ).

Antes da distribuição aleatória, a dieta inicial para cada grupo era quase idêntica em relação à ingestão de macronutrientes e micronutrientes, bem como de produtos de soja e isoflavona ( Tabela 1 ).

Bambos o grupo suplementado com leite de soja e o grupo controle diminuíram significativamente sua ingestão de energia e da maioria dos nutrientes durante o período do estudo dietético. No grupo suplementado com leite de soja, foi observada uma redução estatisticamente significativa (mostrada como %) para energia (8,0%), carboidrato (11,6%), cálcio (10,3%), colesterol (22,0%), caroteno (35,7%), vitaminas B2 (15,0%) e C (34,4%), sal (19,4%) e álcool (43,8%). No grupo controle, foi observada uma redução estatisticamente significativa (mostrada como %) para energia (10,8%), proteína (11,1%), gordura (12,4%), colesterol (16,6%), carboidrato (9,4%), cálcio (8,2%), retinol (12,7%) e vitaminas B2 (16,1%) e C (15,6%). Entretanto, as densidades de nutrientes (calculadas como ingestão de nutrientes dividida pela energia) não se alteraram estatisticamente de forma significativa, exceto por aumentos em proteínas (9,8%), fibra bruta (11,0%), ferro (42,6%) e vitaminas B1 (11,8%) e E (23,5%) e diminuições em carboidratos (3,6%), colesterol (16,6%), vitamina C (31,0%) e sal (11,8%) no grupo suplementado por leite de soja (dados não mostrados). No grupo controle, as densidades de nutrientes não se alteraram significativamente para nenhum nutriente testado.

A média (desvio padrão) do consumo diário de leite de soja estimado a partir dos registros de dieta foi de 354,8 mL (70,1 mL) no grupo suplementado com leite de soja. Com base nos registros de consumo diário de leite de soja ao longo do período do estudo dietético, a média (DP) de consumo de leite de soja foi de 365,0 mL (46,1 mL). A ingestão média de isoflavonas foi cerca de 4,5 vezes maior no final do período de estudo dietético, em comparação com a ingestão anterior. Esta mudança foi estatisticamente significativa ( P = .0001). A ingestão de produtos de soja que não o leite de soja e isoflavona desses produtos foi reduzida em termos de densidades de nutrientes (20,4% e 19,3%, respectivamente) ao final do período do estudo dietético no grupo suplementado com leite de soja, mas essas diferenças não alcançaram significância estatística.

Não houve alterações estatisticamente significativas na ingestão de isoflavonas dividida pela energia no grupo controle antes e depois do período do estudo dietético.

As concentrações iniciais e finais de hormônios séricos são mostradas para cada grupo na Tabela 2 . A concentração de estrona foi muito baixa para ser medida (<10 pg/mL) em duas mulheres do grupo suplementado com leite de soja durante o período do estudo dietético; para fins de análise, atribuímos-lhes uma concentração sérica de estrona de 10 pg/mL. A concentração média de estrona diminuiu significativamente em 23% ( P = .02) no grupo suplementado com leite de soja e, no grupo controle, aumentou em 0,6%. A concentração média de estradiol diminuiu 27% no grupo suplementado com leite de soja e aumentou 4% no grupo controle. Entretanto, essas alterações entre os dois grupos dietéticos não foram estatisticamente significativas ( P = 0,20 para estrona e P 4,22 para estradiol). O SHBG permaneceu relativamente estável em ambos os grupos.

O 3º e 4º ciclos menstruais foram, em média, quase 2 dias mais longos do que o 1º ciclo menstrual no grupo suplementado com leite de soja, enquanto que, no grupo controle, esses dois ciclos foram quase 1 dia mais curtos do que o 1º ciclo menstrual ( Tabela 3 ). Entretanto, essas mudanças na duração do ciclo não foram estatisticamente significativas em ambos os grupos. Não houve diferença significativa na duração média dos quatro ciclos menstruais entre os dois grupos (as médias foram de 31,1 e 30,3 dias no grupo com suplemento de soja e no grupo controle, respectivamente).

Restringimos nossa análise estatística a mulheres que forneceram amostras de sangue com no máximo 1 dia de intervalo nos ciclos 1 e 3 (21 mulheres no grupo suplementado com leite de soja e 23 mulheres no grupo controle). Entre essas mulheres, os dias de coleta de sangue variaram do 9º ao 12º dia no ciclo 1, bem como no ciclo 3. Não houve diferenças significativas nas concentrações hormonais na linha de base entre os dois grupos. A média (DP) de ingestão de leite de soja por dia foi de 360,7 mL (68,4 mL) no grupo suplementado por leite de soja. A média (DP) da ingestão média estimada de isoflavona do leite de soja e outros produtos de soja foi de 29,5 mg (27,1 mg) e 121,2 mg (22,3 mg) na linha de base e no final do período do estudo dietético, respectivamente, no grupo suplementado por leite de soja. Os valores correspondentes para a ingestão de isoflavonas no grupo controle foram de 22,0 mg (12,7 mg) e 20,6 mg (14,0 mg), respectivamente. As mudanças na ingestão de nutrientes, bem como de isoflavona nos subgrupos selecionados foram semelhantes às observadas para os subgrupos completos, ou seja, em todos os sujeitos (dados não mostrados). A concentração sérica de estrona foi significativamente reduzida em 30,1% ( P = .005) no grupo suplementado com leite de soja quando a comparação foi entre valores antes e depois do período do estudo dietético e aumentou em 3% no grupo controle, respectivamente, embora a diferença na mudança entre os dois grupos tenha sido apenas de significância limítrofe ( P = .07) ( Tabela 2 ). As concentrações de estradiol diminuíram 33,2% no grupo suplementado com leite de soja e aumentaram 10% no grupo controle, respectivamente, mas essas mudanças nos valores não foram significativamente diferentes quando comparados os dois grupos. O 4º ciclo menstrual foi 3,4 dias maior que o 1º ciclo menstrual no grupo suplementado com leite de soja e 2,6 dias menor no grupo controle ( Tabela 3 ). Entretanto, essas mudanças não alcançaram significância estatística.

DISCUSSÃO

Nossos resultados suportam a hipótese de que o consumo de soja altera as concentrações de hormônio esteróide ovariano circulante em mulheres pré-menopausadas. Para nosso conhecimento, apenas três estudos avaliaram previamente o efeito da dieta de soja no estado de estrogênio de mulheres na pré-menopausa ( 19-21 ). Entretanto, todos esses estudos eram pequenos (menos de 15 sujeitos) e não incluíam um grupo de controle. Em nosso estudo, alocamos aleatoriamente sujeitos a um grupo experimental ou a um grupo controle. O tamanho da amostra do nosso estudo foi maior do que o dos estudos anteriores, embora não fosse grande o suficiente para obter potência suficiente. Com este tamanho da amostra, o poder de encontrar uma diferença significativa na concentração de estrona entre os dois grupos foi de apenas 53%.

Devemos observar que, ao contrário dos estudos de intervenção dietética publicados empregando alimentos de soja, em nosso estudo, sujeitos tanto do grupo suplementado com leite de soja quanto do grupo controle consumiram produtos de soja na linha de base. Assim, investigamos essencialmente o efeito do maior ou menor nível de ingestão de soja sobre as concentrações hormonais.

Lu et al. ( 20 ) encontraram diminuição das concentrações de estradiol em seis mulheres saudáveis na pré-menopausa durante a alimentação com soja de três porções de 12ozes por dia de leite de soja (cerca de 200 mg de isoflavonas por dia) durante 1 mês. Cassidy et al. ( 19 ) observaram que os picos médios de hormônio luteinizante e folículo-estimulante foram suprimidos, mas o estradiol foi aumentado durante a intervenção dietética com proteína de soja (60 g de proteína de soja contendo 45 mg de isoflavonas conjugadas). Posteriormente, eles não relataram alterações no estradiol, hormônio luteinizante e hormônio folículo-estimulante durante a dieta com meia dose de isoflavonas conjugadas ou a mesma dose de isoflavonas não conjugadas ( 22 ) . Petrakis et al. ( 21 ) relataram um aumento no estradiol durante os 6 meses de consumo de soja (38 g de proteína de soja isolada contendo 38 mg de genisteína). Em seu estudo, as medidas de sangue não foram feitas no mesmo momento do ciclo menstrual. Portanto, as mudanças na concentração de estradiol foram estimadas usando curvas de melhor ajuste geradas por computador.

Os achados referentes a alterações nos níveis séricos de estradiol em estudos anteriores são um tanto contraditórios, o que pode ser devido a variações na quantidade de isoflavonas consumidas. Petrakis et al. ( 21 ) postularam que a concentração esporadicamente elevada de estradiol observada em seu estudo durante a dieta da soja pode representar evidência de competição entre a ligação de estradiol e isoflavonas aos receptores de estrogênio. Embora os níveis séricos de estradiol possam ser aumentados pela ingestão relativamente baixa de isoflavonas, como observado nos estudos de Cassidy et al. ( 19 ) e Petrakis et al. ( 21 ), a alta ingestão de isoflavonas, devido à estrogenicidade, pode causar uma diminuição nos níveis séricos de hormônio luteinizante e hormônio folículo-estimulante. Isto pode levar a uma diminuição nas concentrações séricas de estrogênio. No presente estudo e no estudo relatado por Lu et al. ( 20 ), os sujeitos experimentais receberam uma quantidade relativamente grande de isoflavonas (cerca de 100 e 200 mg, respectivamente), e ambos os estudos observaram uma diminuição de cerca de 30% na concentração sérica de estradiol na fase folicular. É possível que as isoflavonas alterem a concentração de estradiol através da alteração do metabolismo do estrogênio. Os achados in vitro mostraram que a genisteína antagoniza a síntese transformadora do fator de crescimento induzido pelo estrogênio em granulosa e células theca ( 23 ) e inibe a atividade da 17bhydroxysteroid oxidoreductase tipo I, uma enzima que converte estrona em estradiol ( 24 ). A interação entre as isoflavonas (ou seus metabólitos) e o metabolismo do hormônio esteróide intestinal pode estar relacionada à redução do estradiol. Um tipo similar de interação é postulado para a relação entre a ingestão de fibras e o estradiol ( 25 ) .

Não foram publicados previamente dados sobre os efeitos do consumo de soja nos níveis séricos de estradiol. Uma tendência à diminuição da estrona sérica observada no presente estudo fornece suporte adicional para a hipótese de que isoflavonas podem ter a capacidade de reduzir a síntese de estrogênios.

Houve sugestão de um aumento na duração do ciclo menstrual após a dieta da soja, embora isto não tenha alcançado significância estatística. O prolongamento da duração do ciclo menstrual após a intervenção dietética foi relatado por Cassidy et al. ( 19 ) e Lu et al. ( 20 ) .

A duração média do ciclo do 1º ciclo menstrual foi 2,6 dias maior que a do 4º ciclo menstrual no grupo controle, na análise do subgrupo selecionado ( Tabela 3 ). A razão pela qual a duração do ciclo menstrual dos grupos controle diminuiu ao longo do período de estudo não é clara. É possível que alguns fatores além da dieta possam ter afetado a duração do ciclo e, portanto, a diferença observada na duração do ciclo varia entre os dois grupos pode estar sobrestimada.

Os níveis de estrona e estradiol no soro flutuam durante o ciclo menstrual. As concentrações de estrogênio no grupo suplementado com leite de soja podem parecer inferiores às do grupo controle porque os aumentos na duração do ciclo provavelmente refletem o alongamento da fase folicular ( 26 ) . Os dados sobre as concentrações hormonais dos participantes do estudo ao longo dos ciclos menstruais não estavam disponíveis. Pequenos aumentos dos níveis de estrona e estradiol no grupo controle podem ter sido relacionados com a diminuição da duração do ciclo. Entretanto, apesar das mudanças na duração do ciclo, as concentrações de estrona e estradiol foram bastante estáveis no grupo controle em comparação com o grupo suplementado por leite de soja. Como a flutuação nos níveis de estrogênio sérico faz parte da fisiologia natural, é importante enfatizar que os efeitos da suplementação com soja podem não ser visíveis quando o tamanho do estudo não é grande. Um estudo muito maior (por tamanho e duração) e determinações mais frequentes dos níveis de estrogênio sérico são necessárias para compensar as variações devidas às mudanças fisiológicas naturais.

Não controlamos completamente a dieta fornecendo aos sujeitos todos os alimentos durante o período do estudo. A dieta foi avaliada usando registros de dieta auto-relatados. No entanto, o relato tendencioso por qualquer grupo de estudo é improvável, e a comparação das alterações dietéticas entre os dois grupos é considerada válida. Ambos os grupos dietéticos mostraram uma diminuição no consumo de energia e uma diminuição no consumo de alguns macronutrientes, com base nos registos da dieta. Isto pode ser devido a mudanças sazonais ou à omissão de alguns alimentos que tinham, uma vez que se cansaram de manter registos. É pouco provável que estas razões sejam dependentes do grupo alimentar. Em termos de densidades de nutrientes, a mudança foi principalmente a ingestão de nutrientes ricos em leite de soja no grupo suplementado por leite de soja. Relativamente menos controle da dieta e do estilo de vida durante o período do estudo provavelmente aumentou as taxas de participação, reforçando a generalização desses achados.

O presente estudo sugere que a alta ingestão de leite de soja pode modificar as concentrações de estrogênio circulantes e possivelmente alterar a duração do ciclo menstrual, o que pode ser potencialmente benéfico para diminuir o risco de câncer de mama. Estudos muito maiores são necessários para confirmar a capacidade dos produtos de soja de reduzir os níveis de estrogênio sérico.

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