Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) er en immunologisk test, der almindeligvis anvendes til at måle antistoffer, antigener, proteiner og glykoproteiner i biologiske prøver. Nogle eksempler omfatter: diagnosticering af HIV-infektion, graviditetstest og måling af cytokiner eller opløselige receptorer i celleoverstand eller serum. ELISA-analyser udføres normalt i 96 brøndplader, hvilket gør det muligt at måle flere prøver i et enkelt forsøg. Disse plader skal være specielle absorberende plader (f.eks. NUNC Immuno plader) for at sikre, at antistoffet eller antigenet klæber fast til overfladen. Hver ELISA måler et specifikt antigen, og der findes mange sæt til en række forskellige antigener.
Den ELISA, der er vist i figur 1, er en såkaldt sandwich-ELISA, hvor der anvendes to sæt antistoffer til at påvise sekretionerede produkter, f.eks. cytokiner. Metoden er trinvis i den viste rækkefølge. Første trin består i at belægge ELISA-pladen med et antistof til indfangning, hvorefter overskydende, ubundet antistof vaskes fra pladen. Indfangningsantistoffet er et antistof, der er opdrættet mod det pågældende antigen.
Figur 1. ELISA-metode. Ovenstående er beskrevet en sandwich-ELISA, der viser testens trin, der er nummereret i rækkefølge 1-4.
Næst tilsættes prøven (f.eks. urin, serum eller celleoverskud). Ethvert antigen, der findes i prøven, vil binde sig til det opsamlingsantistof, der allerede belægger pladen. Prøverne tilsættes normalt i to eller tre eksemplarer (for at muliggøre statistisk analyse) og i varierende koncentrationer for at sikre, at de falder inden for assayets detektionsniveau. Igen vaskes overskydende prøver fra pladen.
I trin 3 tilsættes detektionsantistof. Dette antistof er mærket med et enzym, normalt hesteræddikeperoxidase eller alkalisk fosfatase. Detektionsantistoffet binder sig til et eventuelt målantigen, der allerede er bundet på pladen. Endelig tilsættes et substrat til pladen. ELISA-assays er normalt kromogene og anvender en reaktion, der omdanner substratet (f.eks. TMB eller ABTS) til et farvet produkt, som kan måles ved hjælp af en pladelæser.
Bestemmelse af antigenkoncentrationen i en prøve kræver fremstilling af en standardkurve ved hjælp af antigener med en kendt koncentration (vist i figur 2). Koncentrationen af antigen i en prøve kan derefter beregnes ved hjælp af den optiske tæthed (OD).
Figur 2. En typisk standardkurve. Vist er en standardkurve for en IFN-γ-ELISA. For at beregne koncentrationen af antigen i en prøve skal der udarbejdes en standardkurve ved hjælp af en opløsning med kendt koncentration.