Az enzimhez kötött immunoszorbens próba (ELISA) egy immunológiai próba, amelyet általában antitestek, antigének, fehérjék és glikoproteinek mérésére használnak biológiai mintákban. Néhány példa: HIV-fertőzés diagnózisa, terhességi tesztek, valamint citokinek vagy szolubilis receptorok mérése sejtek felülúszójában vagy szérumban. Az ELISA-vizsgálatokat általában 96 lyukú lemezeken végzik, lehetővé téve több minta mérését egyetlen kísérletben. Ezeknek a lemezeknek speciális abszorbens lemezeknek kell lenniük (pl. NUNC Immuno lemezek), hogy az antitest vagy antigén a felülethez tapadjon. Minden ELISA egy specifikus antigént mér, és számos antigénhez széles körben kaphatók készletek.
Az 1. ábrán látható ELISA az úgynevezett szendvics ELISA, itt két antitestkészletet használnak a szekretált termékek, pl. citokinek kimutatására. A módszer az ábrán látható sorrendben lépésenként történik. Az 1. lépés az ELISA-lemez bevonása a befogadó antitesttel, majd a felesleges, nem kötött antitestet lemossuk a lemezről. A befogott ellenanyag a kívánt antigén ellen termelt ellenanyag.
1. ábra. ELISA-módszer. A fent leírt szendvics ELISA, amely a vizsgálat lépéseit mutatja, 1-4. sorrendben számozva.
A következő lépésben a mintát (pl. vizelet, szérum vagy sejtek felülúszója) adjuk hozzá. A mintában található bármely antigén kötődik a lemezt már bevonó befogadó antitesthez. A mintákat általában két- vagy három példányban adják hozzá (a statisztikai elemzés lehetővé tétele érdekében), és különböző koncentrációban, hogy garantálják, hogy a minta a vizsgálat kimutatási szintjein belül marad. A felesleges mintát ismét kimossuk a lemezről.
A 3. lépésben a detektáló ellenanyagot adjuk hozzá. Ezt az antitestet egy enzimmel, általában lóretek-peroxidázzal vagy alkalikus foszfatázzal jelöljük. A detektáló antitest kötődik a lemezen már megkötött célantigénhez. Végül egy szubsztrátot adunk a lemezhez. Az ELISA-próbák általában kromogének, olyan reakciót alkalmaznak, amely a szubsztrátot (pl. TMB vagy ABTS) színes termékké alakítja, amely a lemezolvasó segítségével mérhető.
A mintában lévő antigénkoncentráció meghatározásához standardgörbét kell készíteni ismert koncentrációjú antigének felhasználásával (lásd a 2. ábrát). Az antigén koncentrációja a mintában ezután az optikai sűrűség (OD) segítségével kiszámítható.
2. ábra. Egy tipikus standardgörbe. Az ábrán egy IFN-γ ELISA standard görbe látható. A mintában lévő antigén koncentrációjának kiszámításához egy ismert koncentrációjú oldat felhasználásával kell standardgörbét készíteni.