酵素免疫測定法（ELISA）は、生体試料中の抗体、抗原、タンパク質、糖タンパク質を測定するために一般的に用いられる免疫学的測定法である。 例えば、HIV感染の診断、妊娠検査、細胞上清や血清中のサイトカインや可溶性受容体の測定などが挙げられる。 ELISA法は一般に96ウェルプレートで行われ、1回の実験で多検体の測定が可能である。 これらのプレートは、抗体または抗原が表面に確実に付着するように、特殊な吸収プレート（例：NUNC Immunoプレート）である必要があります。 各ELISAは特定の抗原を測定し、様々な抗原に対応したキットが広く販売されています。
図1の写真のELISAはいわゆるサンドイッチELISAで、ここでは2組の抗体を用いてサイトカインなどの分泌産物を検出することができます。 方法は示された順序で段階的に行われる。 第1ステップでは、ELISAプレートに捕捉抗体をコートし、過剰の未結合抗体はプレートから洗浄される。 捕捉抗体は、目的の抗原に対する抗体で、
図1. ELISA法。 上に記述されているのはサンドイッチELISAで、アッセイのステップを示し、順に1〜4の番号が付けられている。
次にサンプル（例えば尿、血清、または細胞上清）が加えられる。 サンプル中に含まれる抗原は、すでにプレートにコーティングされている捕捉抗体に結合します。 サンプルは通常、二重または三重に添加し（統計解析を可能にするため）、アッセイの検出レベル内に収まるように濃度を変化させる。 ステップ3では、検出用抗体を添加します。 この抗体は酵素で標識されており、通常はホースラディッシュペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼで標識されています。 検出抗体は、すでにプレートに結合している標的抗原に結合します。 最後に、基質がプレートに加えられます。 ELISA法は通常、基質（例えばTMBやABTS）を着色生成物に変換する反応を利用して発色させ、プレートリーダーで測定することができます。 その後、光学濃度（OD）を用いてサンプル中の抗原濃度を算出することができます。 典型的な標準曲線。 IFN-γ ELISAの標準曲線です。 試料中の抗原濃度を求めるには、濃度既知の溶液を用いた標準曲線を作成する必要があります。