Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) är en immunologisk analys som vanligen används för att mäta antikroppar, antigener, proteiner och glykoproteiner i biologiska prover. Några exempel är: diagnos av hiv-infektion, graviditetstester och mätning av cytokiner eller lösliga receptorer i cellsupernatant eller serum. ELISA-analyser utförs i allmänhet i 96 brunnsplattor, vilket gör det möjligt att mäta flera prover i ett enda försök. Dessa plattor måste vara speciella absorberande plattor (t.ex. NUNC Immuno plattor) för att säkerställa att antikroppen eller antigenet fastnar på ytan. Varje ELISA mäter ett specifikt antigen, och kit för en mängd olika antigener finns allmänt tillgängliga.
Den ELISA som avbildas i figur 1 är en s.k. sandwich-ELISA, där två uppsättningar antikroppar används för att detektera utsöndrade produkter, t.ex. cytokiner. Metoden är stegvis i den ordning som visas. Det första steget är att belägga ELISA-plattan med fångstantikroppar. Eventuellt överskott av obundna antikroppar tvättas sedan från plattan. Fångstantikroppen är en antikropp som är uppförd mot det aktuella antigenet.
Figur 1. ELISA-metod. Ovan beskrivs en sandwich ELISA, som visar stegen i analysen, numrerade i ordning 1-4.
Nästan tillsätts provet (t.ex. urin, serum eller cellsupernatant). Varje antigen som finns i provet kommer att binda till den fångstantikropp som redan belägger plattan. Proverna tillsätts vanligen i två eller tre exemplar (för att möjliggöra statistisk analys) och i varierande koncentrationer för att garantera att de ligger inom analysens detektionsnivåer. Återigen tvättas eventuellt överflödigt prov från plattan.
I steg 3 tillsätts detektionsantikroppen. Denna antikropp är märkt med ett enzym, vanligen hästrads peroxidas eller alkaliskt fosfatas. Detektionsantikroppen binder till eventuella målantigen som redan är bundna på plattan. Slutligen tillsätts ett substrat till plattan. ELISA-analyser är vanligtvis kromogena och använder en reaktion som omvandlar substratet (t.ex. TMB eller ABTS) till en färgad produkt som kan mätas med hjälp av en plattläsare.
För att bestämma antigenkoncentrationen i ett prov måste en standardkurva tas fram med hjälp av antigener med en känd koncentration (se figur 2). Koncentrationen av antigen i ett prov kan sedan beräknas med hjälp av den optiska densiteten (OD).
Figur 2. En typisk standardkurva. Här visas en standardkurva för en IFN-γ ELISA. För att beräkna koncentrationen av antigen i ett prov måste en standardkurva med en lösning med känd koncentration utarbetas.